怎样正确的使用液相色谱仪

液相色谱仪介绍：

       高效液相色谱仪(HPLC)也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。

色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。

在环保方面，HPLC可以应用在：

（1）农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷 农药 、除虫剂等

（2）致癌物质：硝基呋喃及其代谢物、霉素、亚硝胺、苯并芘等

（3）水质分析：内分泌污染物等

在生化方面，HPLC可以应用于：

（1）蛋白质分析

（2）肽类的分析

（3）核酸分析

（4）氨基酸分析

液相色谱仪的正确使用和维护：

1、开机设定参数（检测波长、流速），更换所需流动相，检查色谱柱是否正确。

2、排液置换管路中流动相，冲洗进样阀，洗好进样针。

3、冲洗色谱柱进行平衡，其间可提前进行样品的处理，样品信息的注册。

4、平衡好以后进空白试验，排除系统污染。

5、柱子稳定好以后进样，等待运行结束（其间清洗进样针），积分计算，出具报告

液相色谱仪操作步骤：

1、开机操作：

（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；

（2）、自上而下打开组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；

（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的小流量为准；

（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；

（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。

2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；

3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；

4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；

5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；

6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。冲洗过程中关闭D灯、W灯；

7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；

8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，不要擅自拆卸仪器。

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