现象 | 可能的原因 | 解决方法 |
柱压升高 | 色谱柱入口滤片被流动相或样品中颗粒堵住。 | 卸下入口接头的滤片,使用1:1的硝酸溶液超声清洗5min,再用水、甲醇清洗除去水份。 样品及流动相使用0.45µm滤膜除去微量杂质。 |
样品组分在滤片上沉淀堵住滤片。 | 使用流动相作溶剂配制样品。 |
新柱柱效低 | 柱外死体积大。 | 更换连接管,重新连接色谱柱,降低死体积。 |
样品在流动相中溶解不好,影响传质过程。 | 使用合适的流动相或使用流动相溶解样品。 |
新柱接到仪器上后,柱头漏液。 | 柱接头与仪器之间连接管的压环变形量不够。 | 用扳手顺时针方向拧紧1/4圈直到不漏液为止。 |
新柱接到仪器上后,启动仪器没有柱压降。 | 柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。 | 继续开泵,用流动相将柱内气体置换掉。 |
新柱接到仪器上后,检测器出口不断有小气泡出现。 | 柱放置时间过长柱内充装的液体己挥发干。 | 继续开泵,用流动相将柱内气体置换掉。 |
流动相脱气不彻底特别是MeOH/H20体系由于氢键作用很容易出现气泡。 | 配好流动相后一定要进行脱气处理。 |
新柱接到仪器上后柱压降不断增加,甚至超过仪器的耐压限。 | 柱入口滤片被固体颗粒堵塞(或被毒菌堵塞)。 | ①更换或清洗柱入口滤片 ②用0.45µm过滤膜过滤流动相除去微小颗粒物。 |
进样次数增加柱压降逐渐增加。 | 样品中含有不溶于流动相的微小颗粒物。 | 用0.45µm过滤膜过滤样品。
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样品在流动相中析出微小结晶。 | 推荐使用流动相溶解样品。 |
使用—段时间后,柱效下降,分离不好。 | 柱填料被流动相溶解而流失。 | 推荐使用予柱。如柱床层塌陷,用相同型号填料填补。 |
柱填料被样品杂质污染。 | 推荐使用保护柱或用强溶剂冲洗色谱柱除去污染杂质。 |
柱使用一段时间后,柱效下降出现双峰。 | 柱入口床层被污染使柱填料变质。 | 用强溶剂冲洗除去杂质。 |
柱使用—段时间后,柱效下降,出现峰拖尾。 | 柱入口床层被污染。 | 用强溶剂冲洗20-30ml,若效果不明显应废弃。 |
柱使用一段时间后保留值逐渐缩短。 | 柱中固定相流失所致。 | ①更换色谱柱。 ②检查所用的色谱条件是否合适。 |
旧色谱柱柱效低,分离不好,柱入口床层塌陷。 | 填料被流动相溶蚀而流失。 | ①用同型填料填补柱效可部分恢复。 ②对硅胶质填料,流动相PH值在2—7范围内,否则可能被溶蚀。 |
旧色谱柱柱效低分离不好,有时出现双峰。 | 入门填料被污染变质所致。 | ①用强溶剂冲洗。 ②刮除被污染的床层,用同型的填料填补柱效可部分恢复。 ③污染严重,则废弃或重新填装。 |
进样量增大与峰面积增加不成正比.即进样量与峰面积不是线性关系。 | 样品在流动相中的溶解度小,只有部分样品被流动相冲如色谱柱中而另一部分则沉积在柱人口端。 | ①用流动相溶解样品。 ②样品的浓度不宜太大。 ④进样量不宜过大。 |
使用缓冲液作流动相时,柱压降升高很快。 | 霉菌生长所致。 | ①在流动相中加入有毒物质或加叠氯化钠防止霉菌生长。 ②实验结束后先用纯水后用MeOH各冲洗20-30ml后关机。 |
用5µm颗粒填料柱时, 以MeOH/H20作流动相柱压较高。 | MeOH与水之间由于氢键作用黏度增大。 | 可用乙腈/水体系使柱压降低,分离效率更好。 |
长时间放置的色谱柱,出现双峰。 | 柱床层出现干裂。 | 柱放置时,最好使用相应的溶剂充填好,防止受大的机械震动,如床层干裂应废弃掉。 |
流动相洗涤强度由弱渐强时出现很多杂质峰。 | 强溶剂将弱溶剂洗不出的杂质冲出来。 | 不影响柱的性能。 |
在U V色谱图中,靠近死时间处出现负峰。 | 进样时压力波动所致。 | 采用阀进样。 |
样品溶剂比流动相的UV吸收值低。 | 用流动相溶解样品。 |