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液相色谱反相分析超级好用的缓冲盐推荐

发表时间:2021-10-18 18:23

接下来我们也来讲讲水相的部分

简单实用pH为7的纯水作为流动相的方法其实不太多,更多的情况是会在水里面加入一些酸性添加剂、或者缓冲盐


关于酸性的添加剂,比如说甲酸、乙酸,三氟乙酸等等,我们以后有机会再说。这里我们主要来说一下关于缓冲盐使用的一点想法和建议。


01
尽量少用缓冲盐

首先,我们认为缓冲盐被过度使用了。

现在大家都在使用缓冲液,为什么呢?

可能是因为在八十年代,最早做液相色谱的人使用了缓冲液,接下来所有人都跟着使用 50 mM 缓冲盐溶液了。其实除非确实需要,缓冲盐应该尽量少用。原因我们稍后跟大家分析。



02
浓度尽量越低越
其次,在某些特殊的方法中,必须要使用缓冲盐的情况下,那也是浓度越低越好。这也是现在缓冲盐使用的趋势,也就是使用的浓度越来越低, 5 mM 就足够了,最多 25 mM,很少需要使用 50 mM。


03
特别是少用磷酸盐
另外,建议大家少用磷酸盐,特别是在使用乙腈作为有机相的时候。多使用甲酸盐醋酸盐这些与质谱兼容的缓冲盐。碳酸氢盐也是适用于高 pH 的与质谱兼容的缓冲液。当使用缓冲盐时,一定要关心缓冲盐的pKa的值。


缓冲盐推荐

这里给大家推荐一个非常好用的缓冲盐:
pH 3.7 的 20 mM 甲酸铵,在 3.7 时,拥有最大的缓冲能力,缓冲范围是pH2.7-4.7,让碱性的化合物出峰峰型很好。它跟质谱也可以兼容。流动相配置起来也非常的方便。
为什么不建议大家过度使用缓冲盐溶剂呢?


一方面在流动相中加入了缓冲盐以后,样品与流动相、固定相之间的相互作用关系会变的更加复杂


另一方面,含缓冲盐的水相在跟有机相混合的时候,可能会产生局部盐析出的情况,造成系统液相系统压力波动,有时候还得导致单向阀出现故障。如果你使用的是比例阀混合的这种低压混合方式,出现问题的可能性更大。

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特别是缓冲盐度超过100mM的情况下,非常容易发生因为混合不好而造成液相色谱泵的工作不正常,比如突然的压力波动、真实流速的降低等等。


特别是运行重要样品而且是下班时间仪器无人值守的时候。一旦仪器出现类似问题,还没有及时发现处理的时候,不单单可能造成仪器故障、样品失效,还可能耽误其他很多的工作,从而造成不可挽回的损失。

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你是不是跟小编一样也想过,有没有什么办法可以让仪器在出故障报错的时候给我手机发个微信提醒呢?


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